Les ingrédients pharmaceutiques actifs peptidiques (API) ont attiré une attention significative dans l'industrie pharmaceutique en raison de leur grande spécificité, de leur faible toxicité et de leur potentiel pour traiter un large éventail de maladies. En tant que principal fournisseur d'API peptidique, nous nous engageons à fournir des produits peptidiques de haute qualité grâce à des méthodes de synthèse avancées. Dans ce blog, nous nous plongerons dans les différentes façons dont les API peptidiques sont synthétisées.
Synthèse des peptides à phase solide (SPPS)
La synthèse des peptides à phase solide est l'une des méthodes les plus utilisées pour synthétiser les API peptidiques. Cette approche a été lancée par Robert Bruce Merrifield en 1963, qui a révolutionné la synthèse des peptides et lui a valu le prix Nobel de chimie en 1984.
Le principe de base des SPP consiste à attacher l'extrémité C - le premier acide aminé à un support solide insoluble, comme une résine. Cette résine fournit une plate-forme stable pour les réactions chimiques ultérieures. Le groupe amino de l'acide aminé attaché est protégé par un groupe de protection approprié, généralement FMOC (9 - fluorénylméthyloxycarbonyl) ou BOC (tert - butyloxycarbonyl).
Une fois le premier acide aminé attaché à la résine, le groupe de protection de son groupe amino est supprimé, exposant le groupe amino réactif. L'acide aminé suivant, également avec son groupe amino protégé, est ensuite couplé au groupe amino libre de l'acide aminé précédemment attaché à l'aide d'un réactif de couplage. Les réactifs de couplage couramment utilisés comprennent le DIC (n, n '- diisopropylcarbodiimide), hbtu (O - benzotriazole - n, n, n', n '- tétraméthyle - uronium - hexafluoro - phosphate), et hAtu (o - (7 - azabenzotriazol - 1 - yl) - n, n: n' - n: n: n: n: n '- n: n' - n: n '- n: n' - n: n: n ', tétraméthyluronium hexafluorophosphate).
Après chaque étape de couplage, les groupes amino non réagus sont plafonnés pour empêcher la formation de séquences de suppression. Cela se fait généralement en utilisant de l'anhydride acétique. Le cycle de déprotection, de couplage et de plafonnement est répété pour chaque acide aminé dans la séquence peptidique souhaitée.
Une fois que toute la séquence peptidique a été assemblée sur la résine, le peptide est clivé de la résine à l'aide d'un cocktail de clivage. Ce cocktail supprime également tous les groupes de protection de la chaîne latérale qui étaient présents sur les acides aminés pendant la synthèse. Le peptide clivé est ensuite purifié par des méthodes telles que la chromatographie liquide à haute performance (HPLC).
Solution - synthèse du peptide phase
Solution - La synthèse du peptide phase est une méthode plus ancienne mais a toujours ses avantages dans certaines situations. Dans cette méthode, toutes les réactions ont lieu en solution et le peptide n'est pas attaché à un support solide.
La synthèse commence par la protection des groupes amino et carboxyle des acides aminés individuels. Semblable aux SPP, des groupes de protection comme FMOC ou BOC sont utilisés pour le groupe amino, et les groupes d'ester sont utilisés pour protéger le groupe carboxyle.
La première étape est le couplage de deux acides aminés protégés pour former un dipeptide. Ceci est réalisé en utilisant un réactif de couplage, similaire à ceux utilisés dans les SPP. Après la formation du dipeptide, les groupes protégeants à une extrémité du dipeptide sont retirés, puis il est associé à un autre acide aminé ou dipeptide protégé pour former un peptide plus long.
Le processus est répété étape - by - jusqu'à ce que la séquence peptidique souhaitée soit obtenue. L'un des défis de la synthèse de phase de solution est la purification des peptides intermédiaires à chaque étape, car le mélange réactionnel contient divers produits par - produits et matériaux de départ inégaux. La purification est généralement réalisée par extraction, cristallisation ou chromatographie.
Ligature chimique
La ligature chimique est une méthode puissante pour synthétiser de grands peptides ou protéines difficiles à assembler à l'aide de SPP ou de synthèse de phase de solution traditionnelles. L'une des méthodes de ligature chimique les plus connues est la ligature chimique indigène (NCL).
Dans NCL, un peptide avec un thioester terminal C réagit avec un autre peptide avec un résidu N - Terminal Cystéine. La réaction se produit dans des conditions aqueuses légères et entraîne la formation d'une liaison peptidique native entre les deux peptides.
Le processus consiste à synthétiser d'abord deux segments de peptides ou plus à l'aide de SPPS ou de synthèse de phase de solution. Un segment est préparé avec un thioester terminal c et l'autre avec une cystéine n - terminale. Ces segments sont ensuite mélangés dans un tampon approprié et la réaction de ligature a lieu. Après la ligature, si nécessaire, le résidu de cystéine peut être encore modifié ou utilisé comme poignée pour des réactions chimiques supplémentaires.
Synthèse convergente
La synthèse convergente est une stratégie qui combine les avantages du SPPS et de la ligature chimique. Au lieu de synthétiser toute la séquence peptidique de manière linéaire, le peptide est divisé en segments plus petits, qui sont synthétisés séparément à l'aide de SPPS.
Ces segments sont ensuite ligaturés ensemble à l'aide de méthodes de ligature chimique. Cette approche réduit le nombre d'étapes de couplage requises pour la synthèse de grands peptides, ce qui peut améliorer le rendement et la pureté globaux du produit final. Par exemple, un long peptide peut être divisé en trois ou quatre segments, chacun contenant 10 à 20 acides aminés. Ces segments sont synthétisés sur la résine, clivés, puis ligaturés de manière convergente.
Exemples de nos API peptidiques
Nous offrons une large gamme d'API peptidiques, notammentC20 - OTB - GLU (OBBU) - ATBI10 - ATBU) PHOTOS - O OIE - OANA - OE,C20 (OTBU) - GLU (OTBU), etPalmitoyl - Glu (OSU) - OTBU. Ces peptides sont synthétisés en utilisant les méthodes avancées décrites ci-dessus, garantissant une pureté et une qualité de haute.
Contrôle de la qualité dans la synthèse de l'API peptidique
Le contrôle de la qualité est de la plus haute importance dans la synthèse des API peptidiques. Nous avons un système complet de contrôle de la qualité en place pour nous assurer que nos produits répondent aux normes les plus élevées.
Après la synthèse, le peptide est analysé par diverses techniques, notamment le HPLC, la spectrométrie de masse (MS) et la résonance magnétique nucléaire (RMN). Le HPLC est utilisé pour déterminer la pureté du peptide, tandis que la MS est utilisée pour confirmer le poids moléculaire du peptide. La RMN peut fournir des informations sur la structure et la conformation du peptide.
Nous effectuons également des études de stabilité pour nous assurer que les API peptidiques restent stables dans différentes conditions de stockage. Cela comprend le test du peptide à différentes températures, valeurs de pH et en présence de divers excipients.
Conclusion
La synthèse des API peptidiques est un processus complexe et multi-étapes qui nécessite des techniques avancées et un contrôle de qualité strict. En tant que fournisseur d'API peptidique, nous explorons constamment de nouvelles méthodes et technologies pour améliorer l'efficacité et la qualité de notre synthèse. Que ce soit par la synthèse des peptides en phase solide, la synthèse de phase de solution - la ligature chimique ou la synthèse convergente, nous nous engageons à fournir à nos clients des produits peptidiques de haute qualité.
Si vous êtes intéressé à acheter nos API peptidiques ou à avoir des questions sur la synthèse des peptides, n'hésitez pas à nous contacter pour des discussions sur l'approvisionnement. Nous sommes impatients de travailler avec vous pour répondre à vos besoins en API peptidique.
Références
- Fields, GB et Noble, RL (1990). Synthèse des peptides solides en phase utilisant des acides aminés 9 - fluorénylméthoxycarbonyle. International Journal of Peptide and Protein Research, 35 (2), 161 - 214.
- Dawson, PE, Muir, TW, Clark - Lewis, I., et Kent, SBH (1994). Synthèse des protéines par ligature chimique native. Science, 266 (5186), 776 - 779.
- Chan, WC et White, PD (2000). Synthèse des peptides de phase solide FMOC: une approche pratique. Oxford University Press.