Dans le domaine de la recherche et du développement peptidiques, la pureté des peptides du catalogue est de la plus haute importance. En tant que fournisseur de peptides de catalogue dédié, nous comprenons l'importance de fournir des produits de haute qualité à nos clients. Parfois, malgré nos meilleurs efforts dans les processus initiaux de synthèse et de purification, il peut être nécessaire de purification supplémentaire des peptides du catalogue. Dans ce blog, nous explorerons diverses méthodes et considérations pour des peptides de catalogue de purification supplémentaires en cas de besoin.
Pourquoi une nouvelle purification?
Il existe plusieurs raisons pour lesquelles une purification supplémentaire des peptides de catalogue pourrait être nécessaire. Premièrement, dans des applications de recherche hautement sensibles telles que les tests basés sur les cellules, les études in vivo ou la recherche en biologie structurelle, même les traces d'impuretés peuvent avoir un impact significatif sur les résultats expérimentaux. Les impuretés pourraient potentiellement interférer avec l'activité biologique du peptide, conduisant à de faux positifs ou négatifs.
Deuxièmement, les exigences réglementaires dans certaines industries, comme les produits pharmaceutiques, exigent un niveau de pureté très élevé pour les peptides utilisés dans le développement de médicaments. Si un peptide est considéré comme un agent thérapeutique potentiel, toutes les impuretés pourraient présenter des risques pour la sécurité des patients, et donc, des étapes de purification supplémentaires sont essentielles.
Méthodes chromatographiques
Inversé - phase élevée - chromatographie liquide de performance (RP - HPLC)
RP - HPLC est l'une des méthodes les plus utilisées pour la purification des peptides. Il sépare les peptides en fonction de leur hydrophobicité. La phase stationnaire dans RP - HPLC est un matériau hydrophobe, généralement une colonne basée sur la silice avec des chaînes alkyle attachées (par exemple, C18 ou C8). Les peptides avec différentes hydrophobicités interagiront différemment avec la phase stationnaire, entraînant différents temps de rétention.
Pour purifier davantage les peptides de catalogue à l'aide de RP - HPLC, nous devons d'abord sélectionner une phase mobile appropriée. Une phase mobile commune se compose d'un mélange d'eau et d'un solvant organique tel que de l'acétonitrile ou du méthanol, avec l'ajout d'une petite quantité d'acide (par exemple, acide trifluoroacétique, TFA) pour améliorer la forme maximale. En ajustant le gradient du solvant organique, nous pouvons optimiser la séparation du peptide cible des impuretés.
Par exemple, si nous avons un peptide de catalogue commeLL-37, peptide antimicrobien, qui est un peptide antimicrobien avec des applications thérapeutiques potentielles, RP - HPLC peut être utilisé pour éliminer toute synthèse restante par - produits ou fragments dégradés. Le LL - 37 purifié peut ensuite être utilisé dans des tests d'activité antimicrobiens plus précis.
Ion - chromatographie d'échange
ION - La chromatographie d'échange sépare les peptides en fonction de leur charge. Il existe deux types principaux: la chromatographie d'échange cation - échange (CEX) et la chromatographie d'échange anion (AEX). Dans CEX, la phase stationnaire a un groupe chargé négativement, et les peptides avec une charge positive nette lui se lieront. Dans AEX, la phase stationnaire est chargée positivement et des peptides chargés négativement seront conservés.
Le choix entre CEX et AEX dépend du point isoélectrique (PI) du peptide. Si le Pi du peptide est en dessous du pH de la phase mobile, le peptide aura une charge négative nette et AEX peut être utilisé. Inversement, si le Pi est au-dessus du pH de la phase mobile, CEX est plus approprié.
Par exemple,Uréistachykinine II, un peptide avec un profil de charge spécifique, peut être davantage purifié en utilisant la chromatographie d'échange ion. En sélectionnant soigneusement le pH de la phase mobile et la force ionique, nous pouvons réaliser une bonne séparation du peptide cible des autres impuretés chargées.
Méthodes électrophorétiques
Dodécyl sulfate de sodium - électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS - Page)
Bien que SDS - PAGE soit principalement utilisé pour l'analyse des protéines, il peut également être appliqué à la purification des peptides dans une certaine mesure. Dans SDS - Page, les peptides sont dénaturés par SDS et séparés en fonction de leur poids moléculaire. Les peptides migrent à travers un gel de polyacrylamide sous l'influence d'un champ électrique.
Après électrophorèse, le gel peut être coloré pour visualiser les peptides. La bande correspondant au peptide cible peut ensuite être excisée du gel, et le peptide peut être élué à partir de la matrice du gel. Cependant, cette méthode a certaines limites. Le processus d'élution peut être complexe et il peut y avoir une certaine perte de peptide pendant la purification. De plus, SDS peut être difficile à éliminer complètement du peptide purifié.
Électrophorèse capillaire (CE)
L'électrophorèse capillaire est une puissante technique de séparation pour les peptides. Il offre une efficacité de séparation élevée, un temps d'analyse court et une faible consommation d'échantillons. CE sépare les peptides en fonction de leur rapport de masse de charge - à -. Il existe différents modes de CE, tels que l'électrophorèse de la zone capillaire (CZE), l'électrophorèse de gel capillaire (CGE) et la chromatographie électrocinétique micellaire (MEKC).
CZE est le mode le plus utilisé pour l'analyse et la purification des peptides. Dans CZE, les peptides sont séparés dans un capillaire rempli de tampon sous un champ électrique. La séparation est basée sur les différences dans la mobilité électrophorétique des peptides. Le CE peut être couplé à diverses méthodes de détection, telles que l'absorption des UV, la fluorescence et la spectrométrie de masse, pour améliorer la précision de l'identification et de la purification du peptide.
Autres considérations
Solubilité
La solubilité du peptide est un facteur important dans le processus de purification. Si un peptide a une mauvaise solubilité dans les solvants de purification, il peut entraîner des précipitations pendant la purification, ce qui affectera la récupération et la pureté du peptide. Pour améliorer la solubilité des peptides, nous pouvons ajuster le pH du solvant, ajouter des solvants ou utiliser des agents de solubilisation spécifiques.
Analyse de la pureté
Après une purification supplémentaire, il est crucial d'analyser la pureté du peptide. Les méthodes courantes d'analyse de la pureté comprennent une chromatographie liquide à haute performance (HPLC), une spectrométrie de masse (MS) et une résonance magnétique nucléaire (RMN). Le HPLC peut fournir des informations sur la pureté chromatographique du peptide, tandis que la SEP peut confirmer le poids moléculaire du peptide et détecter toute impureté avec différentes masses. La RMN peut être utilisée pour déterminer la structure et la pureté du peptide au niveau atomique.
Conclusion
En tant que fournisseur de peptides de catalogue, nous nous engageons à fournir des peptides de haute qualité à nos clients. Lorsque la purification supplémentaire des peptides de catalogue est nécessaire, nous avons une variété de méthodes à notre disposition, y compris des méthodes chromatographiques, des méthodes électrophorétiques et d'autres considérations telles que la solubilité et l'analyse de la pureté. En sélectionnant soigneusement la méthode de purification appropriée et en optimisant les conditions de purification, nous pouvons nous assurer que les peptides répondent aux exigences de pureté élevées de nos clients.
Si vous avez des besoins de peptides de catalogue ou avez besoin de services de purification supplémentaires, n'hésitez pas à nous contacter pour l'approvisionnement et la discussion. Nous sommes impatients de travailler avec vous pour répondre à vos besoins de recherche et de développement peptidiques.
Références
- Snyder, LR, Kirkland, JJ et Dolan, JW (2010). Introduction à la chromatographie liquide moderne. Wiley.
- Jorgenson, JW et Lukacs, KD (1981). Électrophorèse de la zone capillaire. Chemistry analytique, 53 (8), 1298 - 1302.
- Laemmli, Royaume-Uni (1970). Clivage des protéines structurelles lors de l'assemblage de la tête du bactériophage T4. Nature, 227 (5259), 680 - 685.